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PARP Trap和 PARP Trap 检测
发布时间:2023-10-29 20:23 点击次数:
对 DNA 损伤发现和修复是维持细胞正常生理功能非常重要,PARP 蛋白对 DNA 单链断裂修复过程发挥及其重要的作用。PARP-1 和 PARP-2 能精准的识别 DNA 断裂位点并与之结合,但是在 DNA 损伤修复过程中 PARP1 发挥着更为主导的作用。
DNA 双链损伤主要通过非同源末端链接和同源重组两种修复途径进行修复。非同源末端连接的修复途径是一个相对快速但容易出错的过程, 而同源重组的修复途径是一种相对缓慢但精准的修复途径。同源重组需要包括 BRCA、ADM 等多种蛋白的参与。
合成致死是指 2 个或多个非致死基因同时失活导致细胞死亡的现象。当负责 DNA 双链损伤高保真的同源重组修复的 BRCA 发生突变时,抑制单链修复的 PARP 活性,肿瘤细胞增殖过程中发生的 DNA 损伤无法修复,最终导致癌细胞死亡。
在 DNA 单链损伤的修复过程中,PARP 识别损伤位点,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)与 PARP 的活性位点结合后招募 XCCR1 并对其 PAR 化后对损伤位点进行修复,随后 PARP 蛋白脱离损伤位点。目前的 PARP 抑制剂也是主要竞争性结合 PARP 蛋白的 NAD+结合位点。
然而细胞水平的研究发现,PARP 抑制剂要比 PARP 在细胞水平的敲除具有更高的细胞途径,这提示 PARP 抑制剂的作用不仅限于抑制 PARP 活性本身。
实际上,PARP 抑制剂与 PARP 酶结合后,PARP 蛋白会与 DNA 损伤位点结合形成 PARP-DNA 复合物而无法分离,这就造成了其他 DNA 修复蛋白无法参与修复过程,甚至会造成进一步形成 DNA 的双链损伤,这就是制剂所造成的 PARP Trap 效应。
由于 PARP Trap 对肿瘤细胞的具有更强的杀伤效应,因此,对抑制剂的 PARP Trap 能力检测变的非常重要。
目前,大多数的商业化 PARP 活性测方法是通过定量化目标蛋白质(例如组蛋白)的 PARylation 来完成的,并且一次只能测试一种 PARP 酶。BPS Bioscience 的 PARPtrap™ Combo Assay Kit for PARP1 and PARP2 则可以在对同一个抑制剂小分子进行分别进行 PARP1 和 PARP2 Trap 能力的评估。该检测试剂盒应用荧光标记的 DNA 探针,根据 PARP1 或 PARP2 与 DNA 结合所引发偏振光的变化来分析 Trap 效率,此方法适合抑制剂 PARP Trap 能力的高通量筛选。